گزارش کار آزمایشگاه میکروبیولوژی غذایی4

مقدمه:

باسیلوس سرئوس گرم مثبت،میله ای شکل،دارای همولیز بتا است.

بعضی سویه های آن برای انسان مضر هستند وایجاد مسمومیت غذایی می کنند در حالی که بعضی سویه های آن مفید بوده وبرای حیوانات پروبیوتیک هستند.

باسیلوس سرئوس در نقاط مختلف جهان به‌عنوان عامل مسمومیت غذائی گزارش شده است.اسپور معمولا در حبوبات، سبوس گندم، برنج، شیر، گوشت پخته، سوسیس، سوپ، سبزیجات، مرغ و سایر موادغذائی وجود دارد. برخی از اسپورها حتی پس از پختن در غذا باقی می‏مانند و در صورتی كه مواد غذائی در شرایط گرم و مرطوب نگهداری شوند
اسپورها (شكل مقاوم) به باسیل تبدیل شده و پس از تكثیر در غذا یا روده نوعی سم روده‏ای (انتروتوكسین) ترشح می‏نمایند كه منجر به مسمومیت غذائی می‏گردد. این باكتری را به تعداد كم ۱۴درصداز مدفوع افراد سالم نیز به دست آورده‏اند. سم این باكتری پروتئین حساس به حرارت و دارای وزن مولكولی متوسط می‏باشد. اخیرا مشخص شده است كه انواع باسیل سرئوس دو نوع انتروتوكسین تولید می‏كنند. برای ایجاد مسمومیت غذائی ناشی از این باكتری به دو صورت اسهالی و استفراغی بروز می‌نماید. این باكتری علاوه بر مسمومیت غذائی به‌عنوان بیماری‌زای فرصت طلب عمل می‏كند و در افراد دارای ضعف سیستم ایمنی، بیماری شدیدی ایجاد می‏نماید.

نمونه:

ماکارونی شکل دار فله

محیطهای مورد استفاده:

YGC(yeast extract glucose agar)

محیط انتخابی بر ای جداسازی  و شمارش کپک ها و مخمرها در شیر و فرآورده های لبنی است.

این محیط حاوی کلرامفنیکل برای متوقف ساختن رشد فلور میکروبی همراه می باشد.

برخلاف دیگر محیط های کشت مشابه که حاوی آنتی بیوتیک هستند،این محیط را می توان اتوکلاو کرد.

این محیط بعد از تهیه به مدت طولانی پایدار است،حداقل 4 ماه قابل استفاده است.

ترکیبات محیط کشت:

عصاره مخمر:5 گرم                                                    D(+) گلوکز: 20 گرم

کلرامفنیکل:1/0 گرم                                                    آگار: 9/14 گرم

EMB:

از این محیط برای جداسازی و شناسایی انتروباکتریاسه های پاتوژن استفاده می شود.

لاکتوز و ساکارز موجود در این محیط موجب می شود تا سالمونلا و شیگلاهای لاکتوز و ساکارز منفی از ارگانیسم های کلی فرم لاکتوز+ و لاکتوز - ،ساکارز + و فلورای همراه (نظیر پروتئوس ولگاریس،سیترو باکتر، آئروموناس هیدروفیلا)متمایز شوند .

رشد mo های نامطلوب همراه به ویژه باکتری های گرم + تا حد زیادی توسط رنگ های موجود در محیط مهار می شود.

ترکیبات محیط کشت:

پپتون ها:10 گرم                                                             دی پتاسیم هیدروژن فسفات: 2 گرم

لاکتوز:5 گرم                                                                 ساکارز:5گرم

ائوزین y ،زرد رنگ:4/0 گرم                                             متیلن بلو:07/0 گرم

آگار:5/13 گرم

:(Cereus Selective Agar Base) محیط کشت MYP

برای شناسایی،شمارش و جداسازی باسیلوس سرئوس در مواد غذایی استفاده می شود.

باسیلوس سرئوس هنگامیکه به تعداد زیاد در مواد غذایی مشخص وجود داشته باشد تولید کولین فسفریله می کند که مسئول علایم کلینیکی مسمومیت غذایی می باشد.

باسیلوس سرئوس مانیتول – است.به همین جهت مانیتول موجود در محیط اجازه تفکیک باکتری های مانیتول + همراه را فراهم می آورد که به وسیله تغییر رنگ اندیکاتور فنل به زرد مشخص می شود.

باسیلوس سرئوس تحت تاثیر غلظت های پلی میکسین که باکتری های همراهی کننده رایج را مهار     می کند قرار نمی گیرد.

البته افزودن پلی میکسین فقط هنگامی مجاز است که ماده نمونه به داشتن تعداد زیادی mo همراه مشکوک باشد.

باسیلوس سرئوس آنزیم لستیناز تولید می کند.فرآورده های نامحلول ناشی از تجزیه لستین زرده تخم مرغ  در اطراف کلنی های باسیلوس سرئوس انباشته شده و رسوب سفیدی تشکیل می دهند.

در بسیاری از گونه ها واکنش لستیناز خیلی زود ظاهر می شود.

ترکیبات محیط کشت:

پپتون از گوشت:10 گرم                                                  عصاره گوشت:1 گرم

D(-) مانیتول: 10 گرم                                                    کلرور سدیم:10 گرم

فنل رد:025/0 گرم                                                        آگار:12 گرم

موادی که باید به محیط اضافه شوند:

امولسیون زرده تخم مرغ:100ml                                    پلی میکسین:1/0 _ 01/0 گرم

روش کار:

10گرم از نمونه را پس از آسیاب کردن به ارلن حاوی 90  میلی لیتر آب مقطر استریل  اضافه کردیم  سپس  از رقت10^-1،رقت10^-2 رابابرداشتن 1میلی لیتر از رقت قبلی و اضافه کردن به یک لوله حاوی9میلی لیتر آب مقطر استریل بدست آوردیم.

سپس از رقت اول به میزان 0.5میلی لیتر در محیط هایEMBوMYPبه صورت spreadتلقیح کردیم و در نهایت

0.5سی سی از رقت دوم در محیطYGCتلقیح کردیم .

نتایج:

MOهای رشد یافته در محیطMYPمانیتول +بودند وبه دلیل تولید اسید رنگ محیط به رنگ زرد در آمده بود

در محیطYGCوEMBرشد نداشتیم.

 

استاندارد مورد استفاده:

شماره استاندارد2393

هدف و دامنه كاربرد

هدف از تدوين اين استاندارد تعيين ويژگيها و روشهاي آزمون ميكروبيولوژي انواع آرد , غلات پوست كنده و بلغور آنها , انواع رشته و ماكاروني توليد شده در واحدهاي توليدي براي تغذيه انسان مي باشد.

ویژگی میکروبیولوژی انواع رشته وماکارونی

 

نوع فرآورده ويژگي		ماكاروني ساده و رشته	ماكاروني سبزي دار	ماكاروني تخم مرغي
شمارش كلي ميكروارگانيسم ها	در          گرم	حداكثر 10^4	حداكثر 10^4× 5	حداكثر 10^4× 5
كلي فرمها	در گرم	__	__	حداكثر 10^2
استافيلوكوكوس اورئوس  كوآكولاز مثبت	در گرم	__	__	حداكثر 10^2
كلستريديوم پرفرانژانـس	در گرم	__	حداكثر 10^2	__
سالمونـلا	در 25 گرم	__	__	منفي
كپك	در گرم	حداكثر 10^3	حداكثر 10^3	حداكثر 10^3

گزارش کار آزمایشگاه میکروبیولوژی غذایی3

مقدمه:

استافیلوکوکوس اورئوس باکتری گرم مثبت ,کاتالاز مثبت ,کروی شکل و بدون حرکت است که گلوکز را در شرایط هوازی تخمیر کرده و به صورت توده یا خوشه های نامنظم و یا زنجیره های کوتاه دیده میشود.

این باکتری در محیطهای خون دار کلونی های طلائی رنگ تولید میکند که البته یک حالت پایدار نبوده و ممکن است کلونی ها سفید یا بی رنگ باشند این باکتری مانیتول مثبت است و در محیطهای با کلرور سدیم 10 – 5 /7 % رشد کرده و مانیتول را تخمیر میکند جهت شناسائی این باکتری از محیط غنی شده همراه با تلوریت پتاسیم و در شرایط کاملا بی هوازی استاندارد یعنی دمای ˚c 37 استفاده شده و پس از انتقال به محیط دوم , این باکتری تولید کلونی های گرد و محدب و مشکی براق نموده و جهت شناسائی نهائی و دقیق تر تست های تاییدی انجام میشود.

این باکتری از طریق انسان (دست آلوده در تماس با ماده غذائی) و حیوانات خونگرم (خصوصا دام) به ماده غذائی منتقل شده و در فرد ایجاد مسمومیت گذرا همراه با اسهال و استفراغ می نماید.

نمونه:

گوشت چرخ کرده

100گرم از نمونه هنگام خریداری در ظرف استریل قرار داده شدوسپس در یخچال نگهداری شد

24ساعت بعد از خریداری نمونه مورد آزمایش قرار گرفت

 

محیط های مورد استفاده:

محیط کشت BG  (brilliant green broth)

از این محیط برای شناسایی و شمارش کلی فرم ها و همچنین بررسی تحمل حرارتی کلی فرم استفاده می شود.

این محیط سبز رنگ یک محیط انتخابی است.

نمک های صفراوی و بریلیانت گرین موجود در این محیط رشد باکتری های غیر کلی فرمی را که ممکن است در مرحله احتمالی نتیجه مثبت داده باشند را متوقف می کند.

تولید گاز نیز علاوه بر رشد تایید کننده حضور کلی فرم در لوله محیط کشت BG است.

ترکیبات:

ژلاتین:10 گرم                                                        لاکتوز:10 گرم

بریلیانت گرین:0133/0 گرم                                   bile:20 گرم

BAIRD PARKER Agar 

برای جداسازی و تفکیک استافیلو کوک ها در مواد غذایی استفاده می شود.

این محیط حاوی کلرور لیتیوم و تلوریت برای مهار رشد فلورای میکروبی همراه می باشد در حالیکه پیروات و گلایسین به طور انتخابی رشد استافیلوکوک ها تحریک می کند.

کلنی های استافیوکوک هنگامیکه روی این محیط کدر (کدر به علت وجود زرده تخم مرغ) رشد می کنند دو خصوصیت مشخص نشان می دهد:

1- هاله ها و حلقه های مشخصی در نتیجه لیپولیز و پروتئولیز تشکیل می شود.

2- احیای  تلوریت رنگ سیاه تولید می کند.

واکنش زرده تخم مرغ و احیای تلوریت معمولا همراه با واکنش کوآگولاز + دیده می شود و بدین ترتیب می تواند به عنوان اندکسی از واکنش کوآگولاز +به شمار آید.

اضافه کردن سولفا متازین برای متوقف کردن رشد پروتئوس توصیه می شود.

ترکیبات محیط کشت:

پپتون از کازئین:10 گرم                                              عصاره گوشت:5 گرم

عصاره مخمر:1 گرم                                                  پیروات سدیم:10 گرم

گلایسین:12 گرم                                                       کلرور لیتیوم:5 گرم

آگار:15 گرم

موادی که باید به محیط اضافه شوند:

امولسیون زرده تخم مرغ: 50 ml                                  تلوریت پتاسیم:105/0 گرم

در صورت لزوم سولفا متازین:05/0 گرم

EMB(eosin methylen-blue lactose sucrose agar)

از این محیط برای جداسازی و شناسایی انتروباکتریاسه های پاتوژن استفاده می شود.

لاکتوز و ساکارز موجود در این محیط موجب می شود تا سالمونلا و شیگلاهای لاکتوز و ساکارز منفی از ارگانیسم های کلی فرم لاکتوز+ و لاکتوز - ،ساکارز + و فلورای همراه (نظیر پروتئوس ولگاریس،سیترو باکتر، آئروموناس هیدروفیلا)متمایز شوند .

رشد mo های نامطلوب همراه به ویژه باکتری های گرم + تا حد زیادی توسط رنگ های موجود در محیط مهار می شود.

 

ترکیبات محیط کشت:

پپتون ها:10 گرم                                                             دی پتاسیم هیدروژن فسفات: 2 گرم

لاکتوز:5 گرم                                                                 ساکارز:5گرم

ائوزین y ،زرد رنگ:4/0 گرم                                             متیلن بلو:07/0 گرم

آگار:5/13 گرم

YGC(violet red bile agar)

برای شناسایی و شمارش باکتری های کلی فرم از جمله E.Coli در آب،شیر،بستنی،گوشت و مواد غذایی دیگر استفاده می شود.

کریستال ویوله و نمک های صفراوی مقدمتا رشد فلورای باکتریایی گرم + را مهار میکنند.

تجزیه لاکتوز به اسید با تغییر رنگ اندیکاتور PH نوترال رد به قرمز و با رسوب اسیدهای صفراوی مشخص می شود.

ترکیبات محیط کشت:

پپتون از گوشت:7 گرم                                                  عصاره مخمر:3 گرم

کلرور سدیم:5 گرم                                                       لاکتوز :10 گرم

نوترال رد:03/0 گرم                                                     مخلوط نمک های صفراوی:5/1 گرم

کریستال ویوله:002/0 گرم                                             آگار: 13 گرم

محیط Plate count agar:

این محیط هیچ گونه مهارکننده یا اندیکاتور ندارد

برای شمارش کل میکربی شیر،فراورده های لبنی،آب وسایر مواد بکار می رود

به منظور بررسیMoهای کازئولیت استفاده می شود 

ترکیبات:

پپتون ازکازئین      5g

عصاره مخمر         2.5g

گلوکز                        1g

آگار                           14g

روش کار:

10گرم از نمونه را وزن کرده و در ارلن حاوی 90CCآب مقطر استریل ریختیم وبه خوبی به هم زدیم

سپس از رقت10^-1،رقت 10^-2 را با انتقال 1CCاز رقت10^-1به لوله حاوی 9CC آب مقطر،تهیه کردیم

و در مرحله بعد رقت10^-4و 10^-3هم تهیه شد

1CCاز رقت10^-1  را در لوله حاوی محیطBGBریختیم

دمای انکوباسیون:44.5

0.5CCازرقت 10^-1را در محیطBaird parker agarبرای بررسی حضورstaphریختیم(به روشspread)

دمای انکوباسیون:25-30⁰C

همچنین از رقت10^-1،1ccدر محیط هایEMBبرای بررسی کلی فرم هاو1ccاز همین رقت در محیطYGCبرای بررسی کپک ومخمر ریختیم(به روشspread)

دمای انکوباسیون:25-30⁰C

به منظور بدست آوردن تعداد کل باکتری ها1ccاز رقت های10^-3و 10^-4در محیط پلیت کانت تلقیح کردیم

دمای انکوباسیون:30

نتایج:

رشد کپک ومخمر بر روی محیطygc،غیر قابل شمارش بود

شمارش کلی  هر دو غلظت بر روی محیط پلیت کانت غیر قابل شمارش بود

در محیطBGBتولید گاز مشاهده شد

رشد St.aurبرروی محیطBPA،+بود

کلی فرم های کاتالاز+و-روی محیطEMBرشد داشتند

 

استاندارد مورد استفاده:

شماره استاندارد:2394

میکروبیولوژی گوشت قرمز-لاشه،لاشه قطعه بندی شده وگوشت چرخ کرده

هدف:

هدف از تدوین این استانداردتعیین ویژگی های میکروبیولوژی انواع گوشت قرمزحاصل از دام هلی کشتاری مانند:گاو،گاومیش گوساله گوسفندوبزاست.

دامنه کاربرد:

این استاندارد برای لاشه کامل لاشه قطعه بندی شده،گوشت بدون استخوان بسته بندی شده گوشت چرخ کرده تازه ومنجمد حاصل از دام های کشتاری مانند:گاو،گاومیش،گوساله گوسفند وبز تهیه شده در کشتارگاه های صنعتی ومجاز و واحدهای بسته بندی گوشت ومراکز عرضه و فروش مجاز کاربرد دارد.

 

 

                                    ویژگی های میکروبیولوژی بر اساس رویه نموه برداری

نوع فراورده	نوع آزمایش	n	c	حداکثر
				m		M
گوشت چرخ کرده تازه یا منجمد	شمارش کلی میکروارگانیسم ها   استافیلوکوکوسهای کوآگولاز+   اشریشیا کلی   سالمونلا	5     5     5   5	2     2     2   0	10^5*5     10^2*5     50درگرم   منفی در گرم	10^6*5     10^3*5     10^2*5   -

                             ویژگی های میکروبیولوژی بر اساس نمنه برداری منفرد

نوع فراورده	نوع آزمایش	حداکثر مجاز
گوشت چرخ کرده تازه یا منجمد	شمارش کلی میکروارگانیسم ها     استافیلوکوکوس های کوآگولاز+     اشرشیاکلی     سالمونلا	10^5*5درگرم     10^2*5درگرم     50درگرم     منفی در25گرم

گزارش کار آزمایشگاه میکروبیولوژی غذایی2

مقدمه:

لاکتوباسیلوس اسیدوفیلوس(باکتری اسیددوست شیر)،یک گونه از جنس لاکتوباسیلوس است.

یک گونه جورتخمیر است که قند رابه اسید لاکتیک تخمیر می کند وبه نسبت درPH کم (زیر5 )رشد می کند ودمای اپتیمم رشدش حدود37درجه سانتی گراد است.

به طور طبیعی در دستگاه گوارش انسلن وحیوان،دهان و واژن  وجود دارد .

ممکن است بعضی سویه های لاکتوباسیلوس اسیدوفیلوس  دارای ویژگی های پروبیوتیک باشند.این سویه ها تجاری هستند ودر بسیاری از محصولات لبنی استفاده می شوند.

مصرف انواع آب میوه به عنوان یك نوشیدنی كاربرد فراوانی دارد . مصرف آب میوه ها بدلیل دارا بودن انواع ویتامین ها برای بدن مفید است زیرا همیشه امكان استفاده از میوه های تازه وجود ندارد ولی آب میوه ها در بسته بندی های مختلف در طول فعالیت روزانه قابل استفاده هستند. بعلاوه انواع شربت های میوه نیز به عنوان یك نوشیدنی متداول سرو می شود.

مصرف انواع آب میوه به عنوان یك نوشیدنی كاربرد فراوانی دارد . مصرف آب میوه ها بدلیل دارا بودن انواع ویتامین ها برای بدن مفید است زیرا همیشه امكان استفاده از میوه های تازه وجود ندارد ولی آب میوه ها در بسته بندی های مختلف در طول فعالیت روزانه قابل استفاده هستند. بعلاوه انواع شربت های میوه نیز به عنوان یك نوشیدنی متداول سرو می شود.

مصرف انواع آب میوه به عنوان یك نوشیدنی كاربرد فراوانی دارد . مصرف آب میوه ها بدلیل دارا بودن انواع ویتامین ها برای بدن مفید است زیرا همیشه امكان استفاده از میوه های تازه وجود ندارد ولی آب میوه ها در بسته بندی های مختلف در طول فعالیت روزانه قابل استفاده هستند. بعلاوه انواع شربت های میوه نیز به عنوان یك نوشیدنی متداول سرو می شود.نمونه:

آب میوه سن ایچ قوطی با طعم هلو

نمونه به صورت بسته بندی از مغازه خریداری وبلافاصله به آزمایشگاه آورده شد.

محیط های مورد استفاده:

YGC(yeast extract glucose agar)

محیط انتخابی بر ای جداسازی  و شمارش کپک ها و مخمرها در شیر و فرآورده های لبنی است.

این محیط حاوی کلرامفنیکل برای متوقف ساختن رشد فلور میکروبی همراه می باشد.

برخلاف دیگر محیط های کشت مشابه که حاوی آنتی بیوتیک هستند،این محیط را می توان اتوکلاو کرد.

این محیط بعد از تهیه به مدت طولانی پایدار است،حداقل 4 ماه قابل استفاده است.

ترکیبات محیط کشت:

عصاره مخمر:5 گرم                                                    D(+) گلوکز: 20 گرم

کلرامفنیکل:1/0 گرم                                                    آگار: 9/14 گرم

محیط کشت EMB:

از این محیط برای جداسازی و شناسایی انتروباکتریاسه های پاتوژن استفاده می شود.

لاکتوز و ساکارز موجود در این محیط موجب می شود تا سالمونلا و شیگلاهای لاکتوز و ساکارز منفی از ارگانیسم های کلی فرم لاکتوز+ و لاکتوز - ،ساکارز + و فلورای همراه (نظیر پروتئوس ولگاریس،سیترو باکتر، آئروموناس هیدروفیلا)متمایز شوند .

رشد mo های نامطلوب همراه به ویژه باکتری های گرم + تا حد زیادی توسط رنگ های موجود در محیط مهار می شود.

 

ترکیبات محیط کشت:

پپتون ها:10 گرم                                                             دی پتاسیم هیدروژن فسفات: 2 گرم

لاکتوز:5 گرم                                                                 ساکارز:5گرم

ائوزین y ،زرد رنگ:4/0 گرم                                             متیلن بلو:07/0 گرم

آگار:5/13 گرم C agar

 

MRS agar(Lactobacillus Agar )

این محیط برای تغذیه،کشت و جداسازی گونه های لاکتوباسیلوس از هر گونه مورد استفاده می شود.

این محیط کشت حاوی پلی سوربیت،استات، منیزیم و منگنز ( فاکتورهای رشد شناخته شده ی لاکتوباسیل ها )و هم چنین پایه سرشار از مواد مغذی می باشد.

چون این محیط ها کیفیت انتخابی خیلی کمی را نشان می دهند،گونه های پدیو کوکوس و لوکونوستوک و دیگر باکتری های ثانویه ممکن است روی آنها رشد کنند.

ترکیبات محیط کشت:

یونیورسال پپتون:10 گرم                                                   عصاره گوشت:5 گرم

عصاره مخمر:5 گرم                                                        D (+) گلوکز:20 گرم

فسفات دی پتاسیک: 2گرم                                                تواین 80: 1گرم

سیترات دی آمونیوم:2 گرم                                                   استات سدیم:5 گرم

سولفات منیزیم:1/0 گرم                                                     سولفات منگنز 05/0 گرم

آگار:12 گرم

Plate count agar

این محیط هیچ گونه مهارکننده یا اندیکاتور ندارد

برای شمارش کل میکربی شیر،فراورده های لبنی،آب وسایر مواد بکار می رود

به منظور بررسیMoهای کازئولیت استفاده می شود 

ترکیبات:

پپتون ازکازئین      5g

عصاره مخمر         2.5g

گلوکز                        1g

آگار                           14g

 

 

روش کار:

cc 0.5 از نمونه مورد نظر روی محیط پلیت کانت به صورتspreadکشت داده شد به منظور بدست آوردن تعداد کلی باکتری ها

دمای انکوباسیون:C37⁰

0.5ccاز نمونه بر روی محیطMRS agarبرای بررسی وجود باکتری های مقاوم به اسید به صورتspreadکشت داده شد

دمای انکوباسیون: 30⁰C

و0.5ccاز نمونه بر روی محیطYGC agarبه منظور بدست آوردن مخمر وکپک  کشت داده شد

دمای انکوباسیون 22-25⁰C :

نتایج:

نمونه در شمارش کلی،شمارش کپک ومخمر،وبااکتری های مقاوم به اسید بر روی محیطmrsبیش از حد مجاز رشد داشت.

استاندارد مورد استفاده:

شماره استاندارد: 6332

ويژگيهاي ميكروبي افشرده انواع آبميوه در بسته بندي هاي اسپتيك و غير اسپتيك

 

هدف

هدف ازتدوين اين استانداردتعيين ويژگيهاي ميكروبي  افشرده انواع آب ميوه دربسته بنديهاي آسپتيك و غيرآسپتيك مي باشد.

 

  دامنه كاربرد

 اين استانداردشامل  افشرده انواع آب ميوه توليد داخل مي باشدكه درصنايع غذايي براي تهيه آبميوه وسايرفراورده هاي غدايي مصرف مي گردد.

جدول  يك : ويژگيهاي ميكروبي افشرده  انواع آبميوه در بسته بندي غير آسپتيك

 

رديف	ويژگيهــــا	حداكثر حد مجاز در هر گرم نمونه
1	شمارش كلي ميكروارگانيسمهاي هوازي مزوفيل	500
2	باكتريهاي مقاوم به اسيد	10
3	كپك	50
4	مخمر	100

 

جدول شماره 2 ـ ويژگيهاي ميكروبي افشرده انواع آبميوه در بسته بندي آسپتيك

رديف	ويژگيهــــا	حداكثر حد مجاز در هر گرم نمونه
1	شمارش كلي ميكروارگانيسمهاي هوازي مزوفيل	منفي
2	باكتريهاي مقاوم به اسيد	منفي
3	كپك	منفي
4	مخمر	منفي

گزارش کار آزمایشگاه میکروبیولوژی غذایی

مقدمه:

اصطلاح کلی فرم به گروهی از باکتری های خانواده انتروباکتریاسه (باکتری های روده ای) گفته می شود که دارای توانایی خاصی در تخمیر قند لاکتوز باشند. در واقع این باکتری ها نیز همانند سایر اعضای خانواده انتروباکتریاسه باکتری هایی میله ای گرم-منفی، اکسیداز-منفی و کاتالاز-منفی هستند. با این وجود، توانایی تخمیر قند لاکتوز در زمان ۲۴ (تا حداکثر ۴۸) ساعت در دمای ۳۵ درجه سانتیگراد به همراه تولید گاز و اسید در چنین تخمیری باعث شده که گروهی از اعضای این خانواده با هم در گروهی به نام کلی فرم ها قرار گیرند. همانطور که مشخص است این دسته بندی سیستماتیک نیست و تنها بر اساس توانایی انجام نوعی فعالیت متابولیکی در شرایطی خاص تعریف می شود. بنابراین اگرچه گاهی در برخی منابع اعضای کلی فرم ها Escherichia coli، Enterobacter aerogenes، Klebsiella pneumoniae و Citobacter معرفی می شوند ولی بیان صحیح این است که تنها سویه هایی از این باکتری ها در گروه کلی فرم ها جای می گیرند که بتوانند تخمیر لاکتوز را با همان شرتیطی که گفته شد انجام دهند. مثلاً هستند سویه هایی از E. coli که تخمیر قند لاکتوز را بدون تولید گاز انجام می دهند (سویه های انروژنتیک) و یا اینکه سویه هایی هستند از این گونه که تخمیر لاکتوز را با تولید گاز و اسید انجام می دهند ولی در مدتی طولانی تر از 48 ساعت لذا چنین سویه هایی در گروه کلی فرم ها قرار نمی گیرند. با در نظر گرفتن فراوانی بالای انتقال مواد ژنتیکی بین باکتری ها به ویژه باکتری های نزدیک به یکدیگر مشخص است که امکان اینکه علاوه بر گونه هایی که در بالا ذکر شدند سویه های باکتری دیگری از خانواده انتروباکتریاسه نیز در گروه کلی فرم ها قرار بگیرند وجود دارد.

نمونه:پنیرگچی

100گرم به صورت فله خریداری ودر ظرف شیشه ای استریل قرار داده شد.آزمایش24ساعت بعد انجام شد ودر این مدت پنیر داخل یخچال نگهداری می شد.

محیط های کشت مورد استفاده وترکیباتشان:

محیط کشت مک کانکی آگار:

محیطی جامد که برای متمایز کردن جمعیت زیادی ازMoها بکار می رود

مك كانكی آگار معمولترین محیط كشت انتخابی ـ افتراقی بوده ودارای رنگ كریستال ـ ویوله جهت ممانعت از رشد باكتریهای گرم ـ مثبت و هم چنین دارای اندیكاتور قرمز خنثی (Nautral red) جهت نشان دادن خصوصیات افتراقی می باشد . با سیل های گرم ـ منفی به‌آسانی بر روی این محیط رشدنموده و باكتریهای تخمیر كننده لاكتوز ، محصولات اسیدی تولید نموده كه سبب كاهش PH در محیط اطراف كلنی می گردد . اندیكاتور قرمز خنثی در PH اسیدی قرمز رنگ می‌شود . پس میكروارگانسیم های لاكتوز ـ منفی بی رنگ و شفاف مشاهده می شوند ولاکتوز-مثبت ها محیط را به رنگ قرمز-صورتی در میاورندکه ناشی از تولید اسید است.مك كانكی آگار محیط انتخابی و افتراقی مورد استفاده جهت گونه‌های شیگلا می باشد .

کریستال ویوله و نمک های صفراوی از رشد گرم- مثبت ها ممانعت می کنند

ترکیبات:

ژلاتین:17 گرم                                                         آگار:5/13 گرم

املاح صفراوی:5/1 گرم                                          لاکتوز:10 گرم

بافر:5 گرم                                                             کازئین:5/1 گرم

کریستال ویوله:001/0 گرم                                   نوترال رد:03/0 گرم

بافت حیوانی:5/1 گرم                                          PH:2/0 ± 1/7

دما: 25 درجه

محیط کشت BG  (brilliant green broth)

از این محیط برای شناسایی و شمارش کلی فرم ها و همچنین بررسی تحمل حرارتی کلی فرم استفاده می شود.

این محیط سبز رنگ یک محیط انتخابی است.

نمک های صفراوی و بریلیانت گرین موجود در این محیط رشد باکتری های غیر کلی فرمی را که ممکن است در مرحله احتمالی نتیجه مثبت داده باشند را متوقف می کند.

تولید گاز نیز علاوه بر رشد تایید کننده حضور کلی فرم در لوله محیط کشت BG است.

 

 

ترکیبات:

ژلاتین:10 گرم                                                        لاکتوز:10 گرم

بریلیانت گرین:0133/0 گرم                                   bile:20 گرم

محیط PDA(potato dextrose agar) :

ترکیبات:

آگار:20 گرم                                                 دکستروز:20 گرم

آب:1 لیتر                                                    سیب زمینی:250

 

محیط Plate count agar:

این محیط هیچ گونه مهارکننده یا اندیکاتور ندارد

برای شمارش کل میکربی شیر،فراورده های لبنی،آب وسایر مواد بکار می رود

به منظور بررسیMoهای کازئولیت استفاده می شود 

ترکیبات:

پپتون ازکازئین      5g

عصاره مخمر         2.5g

گلوکز                        1g

آگار                           14g

 

 

روش و مراحل انجام آزمایش:

در ابتدا 5 گرم از نمونه پنیر را وزن نموده و در ارلنی که حاوی ml 45 آب مقطر است  می ریزیم.به این ترتیب  رقت ^{1 -}10 را تهیه مینماییم.

سپس  برای تهیه رقت ^2- 10، ml1 از رقت اولیه برداشته و به لوله ای که حاوی ml 9  آب مقطر است اضافه مینماییم.

سپس رقت ^3-  10 را تهیه می نماییم با این تفاوت که این بار ml1 از رقت ^2- 10  برداشته و به لوله ای که حاوی ml 9  آب مقطر است اضافه میکنیم

-ml 1 از نمونه اولیه را برداشته و به محیط BG براث انتقال می دهیم.پلیت را در دمای 35 – 37 درجه به مدت 48 – 24 ساعت قرار میدهیم.برای بررسی وجود E.Coli آن را در دمای 5/44 درجه قرار دادیم.

این محیط دارای لوله درهام است و وجود گاز را نشان می دهد.

-سپس از نمونه اولیه ml 1 برداشته و در پلیت میریزیم و محیط کشت مک کانکی را به آن اضافه مینماییم وبه روش plate urep تلقیح مینماییم. پلیت را در دمای 30 درجه به مدت 24 ساعت قرار میدهیم.در این محیط باکتری هایی که توانایی تخمیر لاکتوز را دارند رشد خواهند کرد.

-از رقت های ^2-10 و ^3-10 ،ml 1 برداشته و هرکدام را به پلیت های جداگانه انتقال داده و محیط  plate count  را به آن اضافه می نماییم.از این محیط برای شمارش باکتری ها استفاده می شود.

-از رقت ^1-  10 ، 1 ml برداشته و به محیط PDA  منتقل مینماییم و با کمک لوله L شکل در سطح پلیت پخش         می نماییم.پلیت را در دمای 30 درجه قرار می دهیم.این محیط کشت برای بررسی رشد کپک ها و مخمر ها مورد استفاده قرار میگیرد. البته در مورد پنیر از این محیط استفاده نشد.

 

 

 

 

نتایج:

شمارش کلیMOها در محیط  پلیت کانتبیش از حد مجاز وغیرقابل  شمارش بود

همچنین کشت در محیط مک کانکی فاقد باکتری لاکتوز+بود

و در نهایت در محیطBGBتولید گاز در لوله دورهام مشاهده شد که نشاندهنده رشد باکتریE.coli وغیرقابل قبول بودن پنیر گچی آذمایش شده بود.

 

استانداردهای مورد استفاده:

استاندارد 2406:

میکروبیولوژی شیر و فرآورده های آن

هدف:

هدف از تدوین این استاندارد تعیین روش نمونه برداری و حد مجاز ویژگی های میکروبیولوژی و روش های آزمون در شیر و فرآورده های آن برای کسباطمینان از سلامت و ایمنی این فرآورده ها برای مصرف انسانی می باشد.

دامنه کاربرد:

این استلاندارد برای شیر خام،انواع فرآورده های پاستوریزه،شیر وخامه فرادما،کنسانتره آب پنیر،انواع کره،انواع پنیر، انواع بستنی،انواع دسر،انواع فرآورده های خشک شیر و انواع فرآورده های تخمیری کاربرد دارد.

 

 

 

 

فرآورده	پنیر تازه و رسیده	پنیر پروسس	انواع پنیر موزارلا	پنیرهای گودا بوتریکیزه،پارمسان کاچیوتا
ویژگی
شمارش کلی MO	_	بیشینه ^310	_	_
کلی فرم ها	بیشینه 10	بیشینه 10	بیشینه 10	کمتر از 10
اشریشیا کلی	منفی	منفی	منفی	منفی
استافیلوکوک های کوآگولاز +	منفی	منفی	منفی	منفی
کپک و مخمر	بیشینه ^210	بیشینه ^210	بیشینه ^210	بیشینه ^210
سالمونلا در 25 گرم	منفی	منفی	منفی	منفی